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细胞外嗜酸杆菌Bispora + spMEY1细胞外葡萄糖苷水解酶的酶学分析及相关基因的克隆和表达.pdf

作者:365bet盘口 来源:365bet娱乐送彩金 发布日期:2019-11-26

中国农业科学院
博士论文
高度嗜酸的真菌Bisporasp
细胞外葡萄糖苷水解酶MEY-1的生产分析
相关基因的克隆和表达
无名:罗慧在
申请学位:博士
主营:生物化学与分子生物学。
导师:范云柳
20080601
摘要
极端微生物在生态系统中发挥着重要作用,并提供富含人类的微生物资源。
越来越多
分离和鉴定极端微生物,分离和纯化极端酶,极端酶工程工作,生物催化和生物转化中的极端酶
该过程中的应用将进一步扩展。
在该文件中,在江西省“721”矿区确定了从铀矿残余水中分离出的真菌MEY-1。
该菌株非常嗜酸性
它属于Bispora属。
嗜酸细菌bisporasp.MEY-1分泌各种重要的工业酶,包括木聚糖。
酶,p。葡聚糖酶,p。甘露聚糖酶,CMCase,淀粉酶,果胶酶,o。半乳糖苷酶,p。半乳糖苷酶和
9种糖苷水解酶,如β-葡萄糖苷酶。
它是一种优秀的工业酶生产者。
一种发酵方法,其中首先建立一种类型的嗜酸真菌MEY.1,同时产生前九种酶。
优化媒体
麸皮成分,玉米芯面粉,魔芋粉与大豆粉的比例,培养物的pH和温度,以及四种不同酶的建立

方法1:麸皮,玉米芯粉末和大豆粉的比例为2:5:2,pH2.0,培养温度20℃,高产率p。甘露
2.0,培训
酶,CMCase,淀粉酶,果胶酶。
方法2:麸皮,玉米芯粉末和大豆粉比例2:5:2,pH
温度30℃,高性能B.葡聚糖酶。
方法3:麸皮,玉米粉末和大豆粉的比例为1:1:7,pH4.0,培养温度。
高产率的α-半乳糖苷酶,β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖苷酶。
方法4:麸皮,玉米芯和大豆粉的比例为5。
2:2,pH4.0,培养温度30℃,木聚糖酶产率高。
本文分析了嗜酸乳杆菌Bisporasp.MEY1的葡萄糖苷水解酶基因序列,并将其克隆到7种9种葡萄糖苷中。
水解酶基因
它们是:木聚糖酶,甘露聚糖酶的三个基因。Gen,淀粉酶W.U.Gen,W.L。U.半乳糖苷酶
原因,半乳糖苷酶基因,葡萄糖苷酶基因,L-小鼠糖苷酶基因。
BLAST比对和序列
在柱一致性分析中,其核苷酸和氨基酸序列之间的最高相似性是:木聚糖酶基因xyll1A,85.3%和93.7。
Geneman 5A,45.4%和47.1。
大鼠糖苷酶rhaA的基因,55.0%和44.9%。
对八种酶进行三维结构和催化位点的模拟。
分析表明,除xyla外,这些基因非常新颖。
Bisupora
U / mL,木材
XyllOA在毕赤酵母中表达。
在振荡器B级,MAN5A甘露聚糖酶表达水平为64。
U / mL,54
葡聚糖酶XYL11A,XYL11B和XYL10A的表达水平分别为83U / mL和101U / mL。
为了测试
他证明了这个基因的功能。
P.纯化Mananase MAN5A和三种木聚糖酶并分析以确定它们的酶学性质。
B.甘露聚糖酶
IA,XYL1
最低最佳pH值。甘露聚糖酶。
三种木聚糖酶XYL11B和XYL10A的最佳pH
IA,
8334U / mg,2049U / mg和5437U / mg。
Km分别为19,907mg / mL,29.96mg / mL和1,005。
Mg / mL。
Vmax为7308.59mg / min,1757.2。
具有高比活性的极端嗜酸性粒细胞。
必需的酶学性质表明,所有这些都具有良好的工业应用前景。
关键词:极端酶,